بررسی چگونگی اثر ‏‎tgf-b2‎‏ بر بیان ژن ‏‎gm-csf‎‏ در دودمان سلولی 5637 از سرطان مثانه انسان

هدف از انجام این مطالعه بررسی چگونگی اثر ‏‎tgf-b2‎‏ بر بیان ژن ‏‎gm-csf‎‏ انسانی می باشد. ‏‎(gm-csf) granulocyte- macrophage colony stimulating factor ‎‏ قادر به تحریک پدیده تمایز در سلولهای مادری خونساز بوده و فعالیت سلولهای بالغ خونی را تحت تاثیر قرار می دهد. از این جهت همیشه بعنوان یک عامل مهم در پدیده خونسازی مورد توجه بوده است. سلولهای 5637 بدلیل افزایش نیمه عمر رونوشتهای ‏‎(mrna)‎‏ و بیان فراوان ژن ‏‎gm-csf‎‏ مدلی مناسب برای بررسی بیان ژن مورد نظر هستند. ‏‎(tgf-b) transforming growth factor-b‎‏ از نخستین عوامل تنظیم کننده پدیده خونسازی بود که مورد شناسایی قرار گرفت. در این مطالعه از ‏‎tgf-b2‎‏ جهت بررسی بیان ژن ‏‎gm-csf‎‏ استفاده شده است. در آزمایشات انجام شده سلولهای 5637 در معرض غلظتهای ‏‎tgf-b2 (0-5) ng/ml‎‏ قرار گرفتند سپس بوسیله ‏‎elisa‎‏ مقدار ‏‎gm-csf‎‏ موجود در محیط رویی کشتهای سلولی مورد سنجش قرار گرفت. آزمایشات نشان دادند که مقدار ‏‎gm-csf‎‏ موجود در محیط کشت پس از 48 ساعت افزایش می یابد این افزایش در غلظت ‏‎5ng/ml‎‏ به بیشترین و معنی دارترین مقدار خود می رسد. در عین حال نتایج نشان دادند که ‏‎tgf-b2‎‏ بر شماره سلولها هیچ تاثیری نداشته و شمارش سلولهای شاهد و آزمون تفاوت با ارزشی ندارد. آزمایش سنجش فعالیت بیولوژیک ‏‎gm-csf‎‏ از محلول رویی کشتهای شاهدو آزمون (به روش تعیین شماره کلنیهای ‏‎cfu-gm‎‏) نشان دادند که احتمالا در پاسخ به ‏‎tgf-b2‎‏ یک نوع عامل مهارکننده فعالیت کلنی زایی نیز تولید می شود که می تواند تا حدودی موجب مهار فعالیت ‏‎gm-csf‎‏ گردد. آزمایشات ‏‎northern blot, slot blot‎‏ از محتوای ‏‎rna‎‏ سلولهای شاهد و آزمون نشان دادند. اگرچه مقدار ‏‎mrnay-actin‎‏ ثابت مانده است مقدار ‏‎mrna‎‏ ‏‎gm-csf‎‏ در سلولهای آزمون افزایش قابل توجهی یافته اند. این آزمایشات ‏‎tgf-b2‎‏ را بعنوان تنظیم کننده مثبت بیان ژن‏‎gm-csf‎‏ در دودمان سلولی 5637 معرفی کرده و تنظیم در سطح رونویسی را مسئول تغییر در بیان ژن ‏‎gm-csf‎‏ در سلولهای 5637 نشان می دهند.